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Brdu免疫熒光染色

簡要描述：Brdu免疫熒光染色 BrdU是另外一種胸腺嘧啶核苷類似物。它也能夠在細(xì)胞增殖時(shí)期代替胸腺嘧啶（T）滲入正在復(fù)制的DNA分子，通過基于EdU與Apollo熒光染料的特異性反應(yīng)檢測(cè)DNA復(fù)制活性，通過檢測(cè)EdU標(biāo)記便能準(zhǔn)確地反映細(xì)胞的增殖情況。

更新時(shí)間：2026-03-20
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實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)

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一、原理

BrdU（溴脫氧尿苷）是胸腺嘧啶類似物，可在S 期摻入新合成 DNA。

通過抗 BrdU 抗體 + 熒光二抗標(biāo)記，熒光陽性細(xì)胞 = 正在增殖 / 近期增殖的細(xì)胞。

二、適用樣本

細(xì)胞爬片（體外培養(yǎng)細(xì)胞）
冰凍切片 / 石蠟切片（小鼠腦組織、腫瘤、腸黏膜、肝臟等）

三、標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)步驟（免疫熒光法）

1. BrdU 標(biāo)記

細(xì)胞：加入終濃度 10–50 μM BrdU，孵育 2–24 h
動(dòng)物：腹腔注射 50–100 mg/kg，2 h 后取材

2. 固定

4% PFA 固定 15–30 min → PBS 洗

3. 通透與變性（關(guān)鍵步驟）

0.2% Triton X-100 通透 10 min
2N HCl 37℃ 變性 30 min（解開 DNA 雙鏈，暴露 BrdU）
0.1M 硼酸鈉中和 10 min

4. 封閉

10% 山羊血清室溫封閉 1 h

5. 一抗孵育

Mouse anti-BrdU 一抗

4℃ 過夜

6. 熒光二抗

FITC/PE/Cy3 熒光二抗

室溫避光 1 h

7. 復(fù)染與封片

DAPI 染核（藍(lán)色）

抗熒光淬滅封片

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Brdu免疫熒光染色

一、原理

二、適用樣本

三、標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)步驟（免疫熒光法）

1. BrdU 標(biāo)記

2. 固定

3. 通透與變性（關(guān)鍵步驟）

4. 封閉

5. 一抗孵育

6. 熒光二抗

7. 復(fù)染與封片

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