小鼠腦組織HE染色實驗服務(wù)

小鼠腦組織HE染色實驗服務(wù)

小鼠腦組織HE染色實驗完整流程

HE染色(蘇木精-伊紅染色)是觀察腦組織形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)的經(jīng)典方法
。以下是詳細(xì)實驗步驟：

一、實驗前準(zhǔn)備

主要試劑與儀器

• ?固定液?：4%多聚甲醛或10%中性福爾馬林

• ?染色液?：Harris蘇木素、0.5%伊紅Y

• ?梯度酒精?：70%-100%乙醇系列

• ?設(shè)備?：石蠟切片機、光學(xué)顯微鏡

二、實驗操作流程

1. 標(biāo)本采集與固定

• 麻醉后心臟灌注(生理鹽水→4%多聚甲醛)

• 完整取出腦組織，10%甲醛固定24-48小時

2. 石蠟包埋

• 梯度脫水：70%→100%乙醇(每級45-90分鐘)

• 透明處理：二甲苯Ⅰ/Ⅱ各30分鐘

• 浸蠟與包埋：60℃石蠟浸漬1.5-2小時

3. 切片制備

• 冠狀切片(厚度4μm)，42℃溫水展片

• 37℃烘箱過夜防脫片

4. HE染色步驟

1. ?脫蠟復(fù)水?：

• 二甲苯Ⅰ/Ⅱ各12分鐘

• 100%→70%乙醇梯度(每級3分鐘)

• 蒸餾水沖洗

2. ?染色?：

• 蘇木素染核13分鐘

• 流水沖洗3分鐘

• 溫水反藍(lán)10分鐘

• 伊紅染胞質(zhì)15秒

3. ?脫水透明?：

• 梯度酒精脫水

• 二甲苯透明

4. ?封片?：

• 中性樹膠封固

• 50℃烘箱干燥20分鐘

三、結(jié)果判讀

• ?細(xì)胞核?：藍(lán)紫色(蘇木素著色)

• ?細(xì)胞質(zhì)?：粉紅色(伊紅著色)

• ?特殊結(jié)構(gòu)?：海馬區(qū)神經(jīng)元分層清晰可見

四、注意事項

1. ?防脫片處理?：載玻片需經(jīng)多聚賴氨酸(PLL)涂層

2. ?染色控制?：蘇木素染色過深可用鹽酸酒精分色

3. ?質(zhì)量控制?：需設(shè)置正常腦組織對照

4. ?應(yīng)用分析?：可結(jié)合免疫組化驗證特定蛋白表達(dá)