WGA熒光染色技術(shù)服務(wù)

一、原理

• WGA 是植物凝集素，特異性結(jié)合細(xì)胞膜糖蛋白 / 糖脂上的 N - 乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）與唾液酸殘基。

• 熒光標(biāo)記 WGA（如Alexa Fluor 488/555/647、FITC、Cy5.5）結(jié)合后，在對應(yīng)激發(fā)光下發(fā)出熒光，清晰勾勒細(xì)胞膜輪廓。

• 關(guān)鍵：不做透化→僅染細(xì)胞膜；做透化→可染高爾基體、糖基化蛋白。

二、標(biāo)準(zhǔn)染色結(jié)果

• 細(xì)胞膜 / 糖萼 / 基底膜 / 幾丁質(zhì)：熒光色（依標(biāo)記染料）

• FITC/Alexa 488：綠色（Ex 488 nm / Em 519 nm）

• Alexa 555/Cy3：紅色（Ex 555 nm / Em 565 nm）

• Alexa 647/Cy5.5：遠(yuǎn)紅 / 近紅外（Ex 647 nm / Em 668 nm）

• 細(xì)胞核：藍(lán)色（DAPI 復(fù)染，Ex 358 nm / Em 461 nm）

• 背景：極低熒光

三、適用樣本

• 活細(xì)胞、固定細(xì)胞爬片

• 石蠟 / 冰凍組織切片（肝、腎、肺、心肌、皮膚、神經(jīng)）

• 類器官、3D 培養(yǎng)

• 真菌（幾丁質(zhì)）、革蘭氏陽性菌、酵母

四、核心用途

1. 細(xì)胞膜輪廓標(biāo)記：細(xì)胞形態(tài)、肥大 / wei縮、遷移、共定位

2. 基底膜 / 糖萼：腎、肺、血管、腫瘤間質(zhì)糖基化

3. 纖維化：與天狼猩紅 / Masson 共染，定位膠原與膜結(jié)構(gòu)

4. 微生物：真菌細(xì)胞壁、細(xì)菌膜、酵母出芽疤痕

5. 神經(jīng)科學(xué)：順行 / 逆行示蹤、突觸標(biāo)記

五、通用步驟（細(xì)胞 + 組織）

1. 樣本前處理

• 活細(xì)胞：PBS 洗 2 次，直接染色（不固定、不透化）

• 固定細(xì)胞：4% 多聚甲醛固定 15–20 min，PBS 洗，不透化

• 石蠟切片：脫蠟→梯度酒精→水→抗原修復(fù)（EDTA pH8.0，可選）→PBS 洗

2. 染色（避光）

• 工作濃度：5–10 μg/mL（熒光 WGA 溶于 PBS）

• 孵育：室溫 / 37℃ 10–30 min（活細(xì)胞≤20 min，防毒性）

3. 洗滌與復(fù)染

• PBS 洗 3×5 min，去未結(jié)合 WGA

• DAPI（1 μg/mL）復(fù)染核：室溫避光 5–10 min，PBS 洗

4. 封片與觀察

• 抗熒光淬滅封片劑封片

• 熒光 / 共聚焦顯微鏡，按染料選激發(fā) / 發(fā)射通道