細(xì)胞石蠟包埋技術(shù)服務(wù)

一、核心用途

• 貼壁 / 懸浮細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察

• 細(xì)胞蛋白表達(dá)定位 / 定量（免疫組化）

• 細(xì)胞凋亡 / 增殖檢測(cè)

• 細(xì)胞纖維化 / 脂質(zhì)沉積特殊染色

• 細(xì)胞基因表達(dá)（原位雜交）

二、標(biāo)準(zhǔn)完整流程（懸浮 / 貼壁通用）

1. 細(xì)胞收集（關(guān)鍵：形成致密細(xì)胞團(tuán)）

• 懸浮細(xì)胞：離心（1000–1500 rpm，5 min），棄上清，PBS 重懸，再離心，重復(fù) 2 次

• 貼壁細(xì)胞：yi酶消化（0.25% yi酶 - EDTA），終止消化，離心收集，PBS 洗 2 次

• 最終：細(xì)胞沉淀≥5×10?個(gè)（太少易丟失、切片無細(xì)胞）

2. 固定（防細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞）

• 細(xì)胞沉淀加4% 多聚甲醛（體積≥沉淀 10 倍），室溫固定 30–60 min

• 離心棄固定液，PBS 洗 2 次（每次 5 min）

3. 細(xì)胞團(tuán)成型（避免松散）

• 固定后細(xì)胞加少量 PBS 重懸，轉(zhuǎn)移至1.5 mL EP 管

• 再次離心（1500 rpm，5 min），棄上清，保留致密細(xì)胞沉淀（約 1–2 mm3）

• 可選：加1% 瓊脂糖（45℃預(yù)熱）包裹細(xì)胞團(tuán)，冷卻凝固，便于后續(xù)操作

4. 脫水（梯度乙醇，防細(xì)胞收縮）

• 70% 乙醇 → 30 min

• 80% 乙醇 → 30 min

• 90% 乙醇 → 30 min

• 95% 乙醇 → 20 min × 2

• 100% 乙醇 → 20 min × 2

5. 透明（置換乙醇，利于浸蠟）

• 二甲苯 Ⅰ → 15 min

• 二甲苯 Ⅱ → 15 min

6. 浸蠟（石蠟浸透細(xì)胞團(tuán)）

• 二甲苯：石蠟（1:1）混合液（56–58℃）→ 30 min

• 石蠟 Ⅰ（56–58℃）→ 60 min

• 石蠟 Ⅱ（56–58℃）→ 60 min

7. 包埋（制成蠟塊）

• 包埋模具預(yù)熱，倒入熔蠟（底層 1–2 mm），稍冷卻

• 用鑷子將細(xì)胞團(tuán)切面朝下置于模具中央

• 補(bǔ)滿熔蠟，冷卻臺(tái)凝固 15–30 min，脫模、修整蠟塊

8. 切片與后續(xù)

• 輪轉(zhuǎn)切片機(jī)切4 μm連續(xù)切片

• 45℃水浴展片，防脫載玻片撈片，60℃烤片 2–4 h

• 后續(xù)：脫蠟→染色（HE/Masson/IHC）→封片