
簡要描述:itraq/TMT 是多肽體外標記定量技術,利用多種同位素試劑標記蛋白多肽N末端或者賴氨酸側鏈基團,不同分子量的試劑對不同來源的樣品進行標記從而實現(xiàn)不同樣品間蛋白質組的比較
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1.樣品準備:將待測樣品進行定量計算出樣品蛋白濃度;
2.蛋白還原烷基化及酶解:每組樣品各取100ug按照iTRAQ試劑禽要求進行處理,使用測序級****溶液酶解后,超濾管離心收集酶解肽段;
3.iTRAQ標記:將iTRAQ試劑平衡到室溫,用150uL異丙.醇溶解,取酶解肽段加入iTRAQ試劑后室溫反應2h,加入水終止反應,等量混合不同組樣品,真空冷凍干燥樣品;
4.LC-MS-MS分析:使用Thermo的Q-Exactive Orbitrao進行串聯(lián)質譜鑒定。
5,數據處理及生信分析
itraq/TMT 是多肽體外標記定量技術,利用多種同位素試劑標記蛋白多肽N末端或者賴氨酸側鏈基團,不同分子量的試劑對不同來源的樣品進行標記從而實現(xiàn)不同樣品間蛋白質組的比較
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