動(dòng)物組織勻漿制備實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物組織勻漿制備實(shí)驗(yàn)流程

1. ?組織取材與預(yù)處理?

• 處死動(dòng)物后迅速取材（如小鼠腦、肝臟等），用預(yù)冷PBS（0.01 M, pH 7.4）漂洗去除血液及雜質(zhì)
  

• 剔除脂肪、血管及結(jié)締組織，濾紙吸干水分，稱(chēng)重（推薦組織量：0.1–1 g）
  

• 短期保存可置于-80℃凍存

2. ?勻漿介質(zhì)配制?

• 常用介質(zhì)：預(yù)冷PBS或生理鹽水（組織重量:介質(zhì)體積=1:9）

• 特殊需求可添加蛋白酶抑制劑或EDTA

3. ?勻漿方法選擇?

• ?手工研磨?：玻璃勻漿器冰浴中上下研磨6–8分鐘

• ?機(jī)械勻漿?：組織搗碎機(jī)（10,000–15,000 rpm，間歇操作避免過(guò)熱）

• ?超聲勻漿?：適用于小樣本（需控制功率和時(shí)間）

4. ?離心與上清液?

• 勻漿液4℃下12,000 ×g離心15分鐘，取上清

• 必要時(shí)用紗布或?yàn)V膜過(guò)濾去除脂質(zhì)及碎片

5. ?質(zhì)量控制與保存?

• 檢測(cè)蛋白濃度或酶活性以評(píng)估勻漿效果

• 分裝后-80℃保存，避免反復(fù)凍融

注意事項(xiàng)

• ?全程低溫操作?：冰浴維持，防止蛋白降解

• ?避免過(guò)度剪切?：尤其對(duì)膜蛋白或細(xì)胞器研究需控制勻漿強(qiáng)度

• ?緩沖液適配性?：根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)調(diào)整pH及離子濃度

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