小鼠脾臟單細(xì)胞懸液的制備方法
更新時(shí)間:2026-03-31 點(diǎn)擊次數(shù):1596
1. 8周齡C57BL/6小鼠摘眼球放血。
2. 在75%的酒精中,浸泡5min。
3. 無菌狀態(tài)下取脾臟。
4. 取一干凈10cm大皿,放入無菌的70um濾網(wǎng),將脾臟置于濾網(wǎng)上,加入2ml培養(yǎng)基。
5. 用研磨棒輕輕研磨臟器,將脾臟組織研磨成單細(xì)胞狀態(tài),直到只剩下臟器的結(jié)締組織為止。
6. 研磨時(shí)動(dòng)作應(yīng)輕柔,用力過大可導(dǎo)致細(xì)胞死亡。
7. 棄去濾網(wǎng)和濾網(wǎng)上的結(jié)締組織,收集平皿內(nèi)的細(xì)胞懸液,400g4min離心沉淀。
8. 用PBS重懸沉淀,就可以進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
小鼠脾臟是重要的免疫器官,位于左側(cè)腹腔、靠近胃的左側(cè),呈長(zhǎng)橢圓狀、暗紅色,質(zhì)地柔軟,富含淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等各類免疫細(xì)胞及實(shí)質(zhì)細(xì)胞。小鼠脾臟單細(xì)胞懸液制備的核心原理是:通過無菌操作獲取完整脾臟組織,去除表面結(jié)締組織和脂肪后,采用機(jī)械研磨結(jié)合酶解(或單純機(jī)械研磨)的方式,將脾臟組織分散為單個(gè)細(xì)胞,經(jīng)過濾去除組織碎片、紅細(xì)胞裂解去除雜細(xì)胞、離心洗滌純化,最終獲得高活率、高純度的單細(xì)胞懸液。該方法適用于流式細(xì)胞術(shù)分析、細(xì)胞培養(yǎng)、Western blot、單細(xì)胞測(cè)序、免疫功能檢測(cè)等各類實(shí)驗(yàn),操作的關(guān)鍵在于全程保持無菌環(huán)境、控制酶解條件,減少細(xì)胞損傷,確保細(xì)胞活性和純度,避免細(xì)胞聚集或污染。